bbs1酶切温度为37摄氏度，反应温度过高或过低都会影响酶活性，甚至导致酶的失活，只有在最适温度下，酶活最高。酶切是对粘末端的DNA分子和载体分子进行切割，以获得相应的粘末端连接。酶切可以是单酶切也可以是双酶切。单酶切操作比较简单，但双酶切如果两种酶所用缓冲液成分不同或反应温度不同，这时可以采用如下措施解决：
1、先用一种酶切，然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一种酶切。
2、先进行低盐要求的酶切，然后添加盐离子浓度到高盐的酶反应要求，加入第二种酶进行酶切。
3、使用通用缓冲液进行双酶切，具体要根据酶的反应要求进行，尽量避免活力损失。
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